В оригинальной статье еще есть очень полезные вставки в виде картинок из книги откуда данный метод брался, но к сожалению сюда не перенеслось.
еще раз ссылка
http://vivci.kardash.com.ua/tehcnologia ... ko%205.htm
Определение бактериальной обсемененности. Его производят по редуктазной пробе, пробе на брожение, сычужно-бродильной пробе и пробе на маслянокислые бактерии.
Проба на редуктазу является косвенным показателем бактериальной обсемененности непастеризованного молока. По результатам пробы на редуктазу судят об общем количестве микробов в молоке. Сущность ее состоит в том, что микробы, размножаясь в молоке, выделяют фермент редуктазу, которая обесцвечивает добавленную к молоку метиленовую синь. Чем больше в молоке микробов, тем быстрее она обесцвечивается.
Результаты редуктазной пробы распространяются на молоко, принимаемое в период до следующего анализа. Пробу на редуктазу отбирают один раз в декаду от партии молока, поступающего из каждого совхоза, колхоза или приемного пункта. Если обнаружено большое бактериальное обсеменение молока, пробу на редуктазу берут чаще. Молоко, поступающее от индивидуальных хозяйств, проверяют по редуктазной пробе в случае подозрения на большую бактериальную обсемененность.
Пробы молока для анализа отбирают стерильным черпачком пли трубкой в стерильные пробирки. В пробирки наливают по 1 мл рабочего раствора метиленовой сини и по 20 мл исследуемого молока, смешивают. Закрывают пробирки стерильными пробками и помещают в термостат при температуре 37° С или в водяную ванну (редуктазник) температурой 37-40° С. Температура должна поддерживаться в течение всего времени не ниже 37-38° С. Вода в ванне должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше.
Время помещения пробирок в термостат считают началом анализа. Наблюдение за изменением окраски молока ведут через 20 мин, 2 ч и через 5 ч 30 мин после начала анализа. Окончанием анализа считается момент обесцвечивания молока, при этом оставшийся небольшой кольцеобразный окрашенный слой вверху (примерно около 1 см) или небольшая окрашенная часть внизу пробирки в расчет не принимаются. В зависимости от времени обесцвечивания молоко относят к одному из 4 классов (табл.4). Однако редуктазная
проба - не единственный метод определения бактериальной обсемененности молока, так как не все микробы выделяют
Таблица 4
одинаковое количество рсдуктазы. Кроме того, пробой на редуктазу нельзя установить качественный состав микрофлоры, а следовательно, и правильно оценить доброкачественное молоко, в котором преобладают молочнокислые бактерии, и недоброкачественное.
Проба на брожение позволяет установить наличие газообразующей микрофлоры, определить качество молока, сдаваемого отдельными поставщиками, и выявить источник его пороков.
В чисто вымытые и хорошо просушенные (стерильные) и ополоснутые 2-3 раза тем же молоком пробирки наливают 20- 30 мл молока. Пробирки закрывают стерильными ватными пробками и ставят в термостат (ванну) при температуре 37-38°С на 24 ч. Через 12 ч после помещения пробирок в термостат пробы осматривают. Хорошим считают молоко, которое еще не свернулось или лишь начинает свертываться. Плохое молоко дает вспученный сгусток. Еще через 12 ч вторично просматривают пробы и по характеру сгустка относят молоко к одному из 4 классов (табл. 5).
Таблица 5
Проба на маслянокислые бактерии может проводиться параллельно с бродильной. Для этого пробирки с молоком, подготовленные так же, как при пробе на брожение, погружают на 30-40 мин в горячую воду (93-95°С). Затем молоко охлаждают в них до 35-40° С и выдерживают в термостате при этой температуре не менее 36 ч. Споры маслянокислых бактерий переносят высокую температуру и при выдержке молока в термостате прорастают, а маслянокислые бактерии образуют рваный сгусток со значительным выделением сыворотки.
Для количественного определения маслянокислых бактерий исследуемое молоко или его разведения высевают в пробирки со стерильным молоком с парафином. Пробирки нагревают в водяной бане до 85° С с выдержкой 10 мин, а затем выдерживают при 35-37° С в течение 3 дней. Наличие маслянокислых бактерий в посевах определяют по образованию газа, масляной кислоты, наличию в препарате споровых бактерий, имеющих вид барабанных палочек и дающих положительную реакцию на гранулезу. ( Гранулеза - крахмалоподобное вещество, окрашивающееся йодом в синий цвет. Для ее обнаружения в каплю воды вносят исследуемый микроб и смешивают с раствором Люголя. Раствор Люголя - 2 части йодистого калия растворяют в 5 мл дистиллированной воды. Сюда же прибавляют 1 ч йода. После растворения (лучше помешивать) добавлять 300 мл дистиллированной воды.). По результатам исследования определяют титр или подсчитывают количество маслянокислых бактерий. Молоко, обсемененное спорами маслянокислых бактерий, является непригодным для выработки сыра.
Сычужно-
бродильная проба проводится в молоке, взятом сразу же после внесения сычужного фермента. Молоко в количестве 20-30 мл помещают в чистые стерильные пробирки, предварительно ополоснутые 2-3 раза тем же молоком из ванны. Пробирки с
пробами помещают в термостат при 37- 40° С на 12 ч, после чего их вынимают и оценивают качество моока по характеру образовавшегося сгустка. Молоко, сыропригодное и доброкачественное по микрофлоре, свертывается через 20-25 мин, а по истечении 12 ч образуется однородный, плотный сгусток-сырок, окруженный прозрачной сывороткой. По сычужно-бродильной пробе молоко классифицируют на 3 класса (табл.6).
Молоко I и II классов пригодно, а III класса непригодно для выработки сыра.
На основании сычужно-бродильной пробы можно предположительно судить о качестве сыра и в случае переработки молока, содержащего газообразующие бактерии, принять необходимые меры: понизить температуру посолки и в первый период созревания, чтобы предотвратить излишнее брожение сыра.